這篇論文研究了綠原酸（Chlorogenic acid）對食管鱗狀細胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）的抑制作用，發現綠原酸可以通過下調BMI1和SOX2的表達來抑制ESCC的生長、遷移和侵襲。

研究背景

1、食管鱗狀細胞癌（ESCC）是中國最常見的癌癥之一，死亡率極高。盡管診斷和治療手段不斷改進，但晚期ESCC患者的5年生存率仍低于25%。

2、現有的手術、化療和放療方法常伴有嚴重的副作用，且晚期ESCC患者面臨藥物和放療耐藥、轉移和復發等問題，導致預后不良。

3、綠原酸是一種廣泛存在于人類飲食中的酚類化合物，具有抗氧化和抗炎等多種生物活性，并已被證明在多種癌癥中具有抗腫瘤作用。然而，綠原酸對ESCC的療效及其分子機制尚不明確。

研究方法

1、細胞培養：使用KYSE30、KYSE70、KYSE140、KYSE150、KYSE180和KYSE510六種ESCC細胞系，分別在37°C和5% CO2條件下培養。

2、細胞增殖檢測：通過CCK-8試劑盒檢測不同濃度綠原酸（0-200 μM）對ESCC細胞增殖的影響。

3、克隆形成實驗：在35mm培養皿中接種500個細胞，培養10天后觀察綠原酸對克隆形成的影響。

4、遷移和侵襲實驗：使用24孔Boyden小室進行遷移和侵襲實驗，細胞在上室培養12小時（遷移）或24小時（侵襲），下室為含綠原酸的完全培養基。

5、寡核苷酸轉染：使用siRNA轉染技術敲低BMI1和SOX2的表達，并檢測綠原酸對細胞增殖和遷移的影響。

6、流式細胞術：檢測綠原酸處理后細胞的周期和凋亡情況。

7、西方印跡：檢測綠原酸處理后細胞和組織中相關蛋白的表達水平。

8、動物模型：建立異位移植和原位移植動物模型，評估綠原酸對ESCC生長的抑制作用。

實驗設計

1、細胞增殖實驗顯示，綠原酸在200 μM濃度下顯著抑制所有六種ESCC細胞系的增殖。

2、克隆形成實驗表明，綠原酸以劑量依賴性方式抑制克隆形成，100 μM濃度的綠原酸即可完全抑制克隆形成。

3、遷移和侵襲實驗結果顯示，綠原酸顯著抑制KYSE30、KYSE140和KYSE180細胞的遷移和侵襲。

4、動物實驗中，異位移植模型顯示綠原酸顯著減少腫瘤體積（減少30.0%-49.1%），原位移植模型顯示綠原酸抑制腫瘤生長。

5、綠原酸處理后，ESCC細胞的BMI1和SOX2表達顯著下調，而OCT4和Nanog表達無顯著變化。

結果與分析

1、綠原酸處理后，ESCC細胞的Survivin表達顯著下降，表明綠原酸通過誘導凋亡而非細胞周期阻滯來抑制ESCC。

2、在4-NQO誘導的食管癌模型中，綠原酸處理組的食管壁厚度顯著低于對照組，生存時間延長17.04%（從60天延長至70.22天）。

3、敲低BMI1或SOX2后，綠原酸對細胞增殖和遷移的抑制作用顯著減弱。

總體結論

1、綠原酸通過下調BMI1和SOX2的表達，抑制ESCC的生長、遷移和侵襲，并延長小鼠的生存時間。

2、這些發現為綠原酸作為ESCC治療藥物的臨床應用提供了新的依據，并揭示了綠原酸通過調節干細胞相關基因表達來抑制ESCC的潛在分子機制。

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